一、体外培养的冠髓和根髓细胞中碱性磷酸酶的活性（论文文献综述）
文冰[1]（2020）在《miR-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及机制研究》文中研究说明背景和目的:人乳牙牙髓干细胞（stem cells fromhuman exfoliated deciduous teeth,SHED）是人类脱落的乳牙牙髓中分离得到的一种属于外胚间充质干细胞的牙源性干细胞,具较强的增殖能力及分化成身体各种类型细胞的潜能,组织来源方便,是细胞治疗和再生医学所需干细胞的理想来源。基于人乳牙牙髓干细胞在特定的培养环境中向神经元分化的特性,人乳牙牙髓干细胞在神经退行性疾病的治疗中发挥着重要作用。最新研究发现mi RNA（micro-RNA,小RNA）在人乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞分化过程中差异表达,在神经元分化中发挥重要作用,但其在人乳牙牙髓干细胞神经分化中的作用机制尚不清楚我们前期的工作发现mi RNA-221（micro-RNA 21,小RNA221）在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程表达上调,并调控人乳牙牙髓干细胞神经分化效率,我们推测mi R-221调控人乳牙牙髓干细胞神经分化。本论文将研究mi R-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及其调控机制,确定mi R-221的靶基因,明确mi R-221调控人乳牙牙髓干细胞神经分化的信号通路,并确定mi R-221通过靶基因调控人乳牙牙髓干细胞神经分化特异信号通路的分子机制。本论文将为人乳牙牙髓干细胞神经分化调控机制的研究提供新的理论基础和新的方向。材料和方法:1.mi RNA-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的表达模式及作用（1）通过流式细胞仪检测人乳牙牙髓干细胞的间充质干细胞特异表面抗原标志物CD29（integrin subunit beta 1,β1整合素）、CD90（Thy-1 cell surface antigen,Thy-1细胞表面抗原）、CD146（melanoma cell adhesion molecule,黑色素瘤细胞粘附分子）和STRO-1（Stromal cell antigen,基质细胞抗原）,细胞粘附分子CD13（membrane alanyl aminopeptidase,膜丙氨酸氨基肽酶）和CD44（CD44 molecule,CD44分子）,造血干细胞阳性标志物CD34（CD34molecule,CD34分子）和CD45（protein tyrosine phosphatase receptor type C,蛋白酪氨酸磷酸酶受体C型）和内皮细胞特异性抗原标记物CD31（platelet and endothelial cell adhesion molecule 1,血小板和内皮细胞粘附分子1）的阳性率;通过免疫荧光实验检测人乳牙牙髓干细胞STRO-1的表达。（2）通过流式细胞仪检测人乳牙牙髓干细胞分化的神经元细胞的成熟神经元特异性抗原标志物NSE（enolase 2,烯醇化酶2）、MAP-2（microtubule associated protein 2,微管联合蛋白-2）、NF-M（neurofilament medium,神经丝蛋白）和TH（tyrosine hydroxylase,酸羟化酶）和神经干细胞特异性抗原Nestin（巢蛋白）的阳性率;通过免疫荧光实验检测人乳牙牙髓干细胞分化的神经元细胞NSE和MAP-2的表达。（3）通过q-PCR检测在人乳牙牙髓干细胞向神经元细胞分化过程中第0、2、4、6、8、10和12天mi RNA-221的表达水平。（4）通过流式细胞仪检测mi R-221 inhibitor（mi R-221抑制剂）、mi R-221mimic（mi R-221模拟物）、Blank（空白对照）和NC（Negative control RNA,阴性对照RNA）转染人乳牙牙髓干细胞后分化成神经元细胞特异标志物NSE和MAP-2的阳性率。2.mi RNA-221的靶基因确定（1）通过生物信息学分析预测mi R-221的靶基因。（2）通过双荧光素酶报告基因分析实验验证mi R-221与靶基因的相互作用。（3）通过q-PCR和western blotting检测在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程mi R-221的靶基因CHD8（chromodomain helicase DNA binding protein 8,染色质螺旋酶DNA结合蛋白8）的m RNA和蛋白表达水平。（4）通过q-PCR和western blotting检测mi R-221 inhibitor、mi R-221mimic、Blank和NC转染人乳牙牙髓干细胞后CHD8的m RNA和蛋白表达水平。3.mi RNA-221调控人乳牙牙髓干细胞Wnt（wingless,无翼的）/β-catenin（β连环蛋白）通路的分子机制（1）通过q-PCR和western blotting检测人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中Wnt/β-catenin通路特异标志物β-catenin、Wnt3A（Wnt family member3A,Wnt家族蛋白3A）、cyclin D1（细胞周期蛋白D1）、cMyc（transcriptional regulator Myc-like,Myc样转录调节因子）、c-Jun（Jun proto-oncogene AP-1 transcription factor subunit,Jun原癌基因AP-1转录因子亚基）和MMP7（matrix metallopeptidase 7,基质金属肽酶7）的m RNA和蛋白表达水平。（2）通过q-PCR和western blotting检测mi R-221 inhibitor、mi R-221
田丽华[2]（2014）在《P物质对体外培养人牙髓细胞生物学特性的影响》文中研究指明随着社会的发展，由各种原因导致的牙齿意外露髓逐渐增多，传统盖髓方法效果往往不理想，近年来，越来越多的学者把牙髓生物学研究的重点放到了牙髓细胞上，从细胞水平为临床研究提供实验基础。目的：采用组织块酶解法培养具有干细胞特性的人牙髓细胞，通过观察P物质对体外培养人牙髓细胞的增殖、分化及超微结构的影响，探讨P物质对体外培养人牙髓细胞生物学特性的影响及其作用机制，为临床开展活髓保存治疗提供一条新的思路。方法：1人牙髓细胞的原代培养及组织来源鉴定选取因阻生或正畸需要而拔除的健康、完整、无龋、无隐裂恒牙，清理牙齿表面后于无菌条件下取出牙髓组织，采用组织块酶解法进行原代培养，首次传代选择原位传代，以后待细胞长满孔底80%后按常规传代方法进行传代。取第3代对数生长期细胞用SABC法进行波形蛋白、角蛋白免疫组化染色，光镜下观察；用HE对盖玻片上的细胞进行染色，光镜下观察细胞形态。2人牙髓细胞生长曲线的检测取第3代人牙髓细胞，制成单细胞悬液，以2×104个/孔的密度接种于24孔板，自接种后第二天开始每天随机消化5孔进行细胞计数，取平均值。连续计数8天，绘制细胞生长曲线。3P物质对HDPCs增殖活性的影响选取第4代人牙髓细胞制备成细胞悬液，以2×104个/ml的密度接种于96孔培养板,每孔200微升。24小时后，弃去原培养液，随机分为5个实验组和1个对照组，另设一空白对照组，实验组分别加入用含1%FBS的DMEM配制的五个浓度的P物质（10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L）；对照组和空白对照组只加含1%FBS的DMEM液，以上7组每孔液量均为200微升。分别于培养第1、2、3、4、5天用CCK-8法测定各孔的吸光度值（A450）。4P物质对HDPCs分化的影响4.1P物质对HDPCs碱性磷酸酶活性的影响实验分组及培养条件同上。分别在药物作用第1、3、5、7天时随机取出一块96孔板，弃培养基，PBS缓冲液冲洗3次，吸干，每孔加入50μl0.1%TritonX-100，4℃冰箱过夜。光镜下观察细胞已无完整结构后，按照碱性磷酸酶试剂盒说明书每孔加入碱性磷酸酶底物100μl，37℃孵育30min，最后以0.2mol/L NaOH50μl终止反应，以空白对照孔调零，在酶标仪上测定410nm波长下各孔的吸光度值（A410）。4.2P物质对HDPCs牙本质涎磷蛋白mRNA的影响取第4代人牙髓细胞，制备成细胞悬液后以104个/ml的浓度接种在25ml培养瓶，每瓶3ml，共6瓶。24小时后将6瓶细胞随机分为3个对照组和3个实验组，对照组每瓶加入含1%FBS的培养液3ml，实验组每瓶加入用含1%FBS的DMEM配制的P物质（10-7mol/L）3ml，于培养第7、14、21天分别随机取出实验组和对照组细胞各1瓶，PBS反复冲洗3遍，加入Trizol1ml反复吹打直至细胞完全裂解，将细胞收集至无酶EP管中，-80℃保存备用。以上实验步骤及分组重复3次。按照试剂盒说明书提取细胞总RNA，RT-PCR检测DSPPmRNA的表达。5P物质对HDPCs超微结构的影响取第4代人牙髓细胞，制备成细胞悬液后以2×104个/ml的浓度接种在25ml培养瓶，每瓶3ml，共6瓶。24小时后将6个培养瓶随机分为2组，实验组和对照组各3瓶，实验组每瓶加入用含1%FBS的DMEM配制的P物质（10-7mol/L）3ml,对照组每瓶加入含1%FBS的培养液3ml。培养48小时后收集细胞，2.5%戊二醛固定2小时，常规样品制备，透射电镜下观察。6统计学分析采用SPSS13.0统计软件对实验所得数据作单因素方差分析，采用S-N-K法进行多重比较。实验数据以均数±标准差表示，P<0.05为差异有统计学意义。结果：1体外培养人牙髓细胞的生物学特性采用组织块酶解法可以成功培养出成纤维样细胞，镜下观察细胞胞体丰满，胞质均匀，细胞核为圆形或卵圆形位于细胞中央，核仁清晰可见，其生长曲线呈典型的“S”型，经免疫组化鉴定，所培养的细胞波形蛋白染色均为阳性、角蛋白染色均为阴性，证实为实验所需要的人牙髓细胞。2P物质对人牙髓细胞增殖与分化的影响浓度为10-9mol/L10-5mol/L的P物质均可促进人牙髓细胞增殖（P＜0.05），提高人牙髓细胞内碱性磷酸酶的活性（P＜0.05），促增殖最佳浓度为10-6mol/L，至第5天，实验组与对照组之间差异无统计学意义，促分化最佳浓度为10-7mol/L；RT-PCR结果显示第7，14，21天，实验组牙本质涎磷蛋白mRNA的表达量均高于对照组；3P物质对人牙髓细胞超微结构的影响透射电镜下可以观察到人牙髓细胞经过P物质作用，粗面内质网明显扩张，线粒体明显增多，说明P物质增强了人牙髓细胞的合成与分泌功能。结论：1采用组织块酶解法培养的人牙髓细胞具备牙髓干细胞的特征，有良好的增殖和分化能力，可以为各种牙髓生物学的体外研究提供可靠的细胞来源。2一定浓度的P物质可以促进牙髓细胞的增殖与分化，增强牙髓细胞的合成与分泌功能，说明P物质在牙髓细胞的增殖分化过程中发挥了积极的调控作用，牙髓损伤的修复愈合过程可能有赖于P物质的参与。
程东梅[3]（2013）在《17β-雌二醇对体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的实验研究》文中认为目的：本实验通过观察不同浓度的17β-雌二醇对体外培养人牙髓细胞增殖、矿化、细胞周期以及碱性磷酸酶活性的影响，以探讨17β-雌二醇对人牙髓细胞生物学特性的影响及作用机制，为将17β-雌二醇作为一种新型的诱导剂应用于人牙髓组织的修复再生提供实验依据。方法：选取因正畸或阻生新鲜拔除的健康、完整、无龋、无隐裂年轻恒牙，在无菌条件下取出牙髓组织，采用组织块酶消化法获取人牙髓细胞并进行原代培养。当细胞生长至铺满孔底80％时进行传代，从而获得大量可供实验用的种子细胞。取第4代对数生长期人牙髓细胞爬片，用SABC法进行波形蛋白和角蛋白免疫组化染色鉴定细胞来源，倒置显微镜下观察。将处于对数生长期的第4代人牙髓细胞用0.25%的胰蛋白酶消化后，制成细胞悬液，以104cells/ml分别接种于五个96孔培养板，每板余出一列培养孔不加液，其余各孔每孔液量150μl，培养24h。观察细胞贴壁情况良好后，弃上清液，PBS缓冲液清洗3次，吸干，将细胞随机分为5个实验组、1个对照组和1个空白对照组，每组选6个孔。实验组：在相应的有细胞孔内加入150μl用含2%活性碳吸附胎牛血清的无酚红高糖DMEM培养液配置的终末浓度分别为10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L的17β-雌二醇。对照组：在相应的有细胞孔内加入150μl含2%活性碳吸附胎牛血清的无酚红高糖DMEM培养液培养。空白对照组：在相应的无细胞孔内加入150μl含2%活性碳吸附胎牛血清的无酚红高糖DMEM培养液培养。连续培养，每天换液以维持药物浓度恒定。MTT比色法检测17β-雌二醇对人牙髓细胞增殖的影响：分别于培养48h和72h时随机取出一个96孔培养板，向所测孔内加入5mg/ml MTT20μl，继续孵育4h，弃孔内液体，每孔加入150μl二甲基亚砜（DMSO），振荡5min，以空白对照孔调零，在酶标仪上测定492nm下各孔的吸光度值。流式细胞术检测17β-雌二醇对人牙髓细胞的细胞周期的影响：选用10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L的17β-雌二醇作为试验组，与对照组（未加药物组）进行细胞周期试验。按照细胞周期试剂盒说明书操作，进行流式细胞仪分析。检测17β-雌二醇对人牙髓细胞的碱性磷酸酶活性的影响：分别在药物作用7天和14天时随机取出一个96孔培养板，弃上清液，PBS缓冲液清洗3次，吸干，每孔加入50μl0.1%TritonX-100，置4℃冰箱过夜。观察细胞已无完整结构，经震荡后，按碱性磷酸酶试剂盒说明书加入碱性磷酸酶底物，每孔100μl，培养箱内置30min，最后每孔加入0.2mol/L NaOH50μl终止反应，以空白对照孔调零，在酶标仪上测定410nm下各孔的吸光度值。茜素红染色法检测17β-雌二醇对人牙髓细胞矿化结节形成的影响：取生长良好的第4代人牙髓细胞，按2×104cells/ml密度爬片于盖玻片后置于六孔板中培养，分为未诱导组和实验组，每组5个复孔。根据17β-雌二醇对人牙髓细胞增殖和对碱性磷酸酶影响的结果，选用10-8mol/L17β-雌二醇作为实验组，以含2%活性碳吸附胎牛血清的无酚红的高糖DMEM培养液作为未诱导组，隔日换液。分别在第7、14、28天，随机取出未诱导组与实验组各一个盖玻片，PBS冲洗细胞3次，4%甲醛溶液固定10～15min，PBS再洗3次，1%茜素红染色10min，最后用蒸馏水清洗，直至吸出的液体无色为止。倒置相差显微镜观察、拍片。采用SPSS13.0统计软件作单因素方差分析，多重比较采用S-N-K法。实验数据以均数±标准差表示，P<0.05为有统计学意义。结果：1体外分离培养的人牙髓细胞波形蛋白染色阳性、角蛋白染色阴性，证实细胞为来自中胚层间充质细胞，符合实验要求。2与对照组相比，在一定浓度范围内17β-雌二醇能促进人牙髓细胞的增殖和细胞周期进程，提高其碱性磷酸酶活性，并增强体外连续培养人牙髓细胞的矿化能力，其中以10-8mol/L的17β-雌二醇作用最为明显。结论：1采用组织块酶消化法可成功培养出人牙髓细胞，培养所得细胞生长旺盛，形态呈均一的成纤维细胞样，可复层生长，符合实验要求。217β-雌二醇可促进体外培养的人牙髓细胞增殖，推进细胞周期进程并提高其碱性磷酸酶活性和矿化能力，说明17β-雌二醇对人牙髓细胞向成牙本质样细胞增殖、分化和矿化有一定的定向诱导作用，显示了17β-雌二醇作为一种新型的诱导剂应用于牙髓组织修复、再生等组织工程领域的可行性。
于娜[4]（2009）在《rhBMP-2和Delta-1对人牙髓干细胞分化影响的实验研究》文中进行了进一步梳理牙髓干细胞是存在于牙髓组织中具有干细胞性质的未分化间充质细胞,具有多向分化潜能,可形成功能性成牙本质细胞和牙本质。Notch受体、配体在牙齿发育早期有表达,在正常牙髓组织中Notch受体不表达,而当成年牙髓损伤后早期其配体Delta-1表达上调,揭示Notch信号参与了牙髓损伤修复过程,并且Delta-1在牙髓干细胞分化中也起重要作用。BMPs属于TGF-β超家族成员,有多种BMPs参与了牙齿的发育。其中BMP-2主要存在于未分化的造牙本质细胞中,并且参与了牙齿形态的早期形成,并在成牙本质细胞的分化形成中起重要的调控作用,其基因的转录在早期的牙胚上皮和后来的成牙本质细胞中都有发现。另外,研究表明BMP-2参与体内牙髓组织损伤修复过程,且在体外可通过调节细胞的增殖状态,促进牙髓细胞ALP合成等作用,诱导牙髓细胞向成牙本质细胞分化。Notch通路和BMPs信号同为调控细胞增殖、分化的关键信号,其作用存在交叉点。rhBMP-2对牙髓干细胞自身Delta表达以及二者共同作用对牙髓干细胞分化有何影响?目前有关这一问题的研究报道较少。本课题在对人牙髓干细胞体外分离、培养和鉴定的基础上,进一步研究分析rhBMP-2和Delta与人牙髓干细胞分化的关系,为探讨影响人牙髓干细胞分化的因素提供参考依据。目的研究rhBMP-2对DPSCs分化及Delta表达的影响,并进一步研究rhBMP-2和Delta-1共同作用对牙髓干细胞分化的影响。方法1.细胞培养与鉴定:牙髓干细胞来源于临床上因正畸或阻生而拔除的健康牙齿,采用酶消化法分离获得并常规原代及传代培养;观察细胞生长状态、形态及其变化;细胞克隆形成率;免疫荧光、免疫组化及RT-PCR法检测细胞表型。2.细胞分化的检测:为检测rhBMP-2对牙髓干细胞ALP活性的影响,取第5代牙髓干细胞,按以下分组:空白对照组,25,50,100ng/ml rhBMP-2组,分别在培养的第7,14,21天采用ALP活性测定试剂盒进行检测。rhBMP-2作用于牙髓干细胞后RT-PCR检测DSPP表达的情况;Western blot方法检测连续培养第7、14、21天Delta表达情况。为检测rhBMP-2和Delta-1联合应用对人牙髓干细胞分化的影响,用含Delta-1质粒转染COS7细胞,从而在培养液中获得含Deltal-Fc融合蛋白。取第5代牙髓干细胞,按以下分组:空白对照组,rhBMP-2、Delta-1以及二者联合作用组,在连续作用的第7、14、21d检测细胞碱性磷酸酶活性。结果:1.连续培养的人牙髓干细胞增殖快,细胞呈集落状生长,克隆形成率为4-35个/104细胞,采用免疫组化染色及RT-PCR方法显示细胞表达vimentin、GFAP、nestin、osteocalcin、Ⅲ型胶原,免疫荧光法显示细胞表达STRO-1。2.rhBMP-2作用组ALP活性明显高于空白对照组（P＜0.01）,并检测出本实验所用rhBMP-2最佳作用浓度为50ng/ml,RT-PCR检测rhBMP-2作用后细胞有DSPP表达。Western-blot检测在细胞生长第21天rhBMP-2刺激组Delta表达高于对照组（P＜0.05）。3.rhBMP-2和Delta-1联合作用组ALP活性明显高于对照组及二者单独作用组（P＜0.01）。结论:1.rhBMP-2可明显增强牙髓干细胞的ALP活性,促进人牙髓干细胞向成牙本质细胞分化。2.rhBMP-2可促进人牙髓干细胞Notch配体Delta的表达。3.rhBMP-2和Delta-1之间存在相互协同作用,可明显增强人牙髓干细胞ALP活性。
王晓东[5]（2009）在《神经营养素在人牙髓干细胞的表达及对细胞增殖分化的影响》文中研究表明人牙髓干细胞（Human Dental Plup Stem Cells,hDPSCs）是存在于牙髓组织中具有干细胞性质的未分化间充质细胞,具有多向分化潜能,可形成功能性的成牙本质细胞和牙本质。神经营养素（Neurotrophins, NTs）是一类多功能生长因子家族,在牙胚的发育过程中有表达,对牙胚发育过程中成牙本质细胞的分化有调节作用,是牙齿发育多因素网络调节以及牙髓修复的重要组成部分。研究发现,NTs对体外培养的牙髓细胞的增殖、分化及钙化均能发挥作用,可能参与调节成牙本质前体细胞的分化。NTs是否在hDPSCs中有表达?NTs是否能促进hDPSCs的增殖和分化?目前尚无有关这一问题的研究报道。本课题在对人牙髓干细胞体外分离、培养和鉴定的基础上,检测NTs在干细胞中的表达,分析NTs对人牙髓干细胞生长特征的影响,为探讨影响人牙髓干细胞增殖和分化的因素,以及NTs在牙齿发育与牙齿损伤修复中的可能作用和应用,提供参考依据。本实验分为三个部分:第一部分:分离培养人牙髓干细胞并进行细胞鉴定。收集临床上因正畸或阻生拔除的健康第三磨牙,采用酶消化法分离获得牙髓细胞,克隆化分离培养hDPSCs;观察hDPSCs的生长状态和细胞形态;计算细胞克隆形成率;免疫组化检测细胞表型,进行细胞的鉴定。结果:牙髓干细胞增殖快,细胞呈集落状生长,集落形成率为4～28个克隆/104细胞;免疫组化染色显示细胞波形丝蛋白和STRO-1阳性表达,角蛋白阴性表达。第二部分:检测hDPSCs中NTs的表达。采用RT-PCR检测细胞中神经营养素mRNA水平的表达;采用免疫组化和western blotting检测细胞中神经营养素蛋白水平的表达。结果:RT-PCR、免疫组化和western blotting的结果显示脑源性神经营养因子阳性表达,同时,western blotting显示神经营养素-4/5阳性表达。RT-PCR、免疫组化和western blotting的结果均显示神经生长因子和神经营养素-3在细胞内呈阴性表达。第三部分:检测NTs对hDPSCs增殖与分化的影响。取第3～5代hDPSCs,用不同浓度的NTs刺激细胞生长,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测NTs对细胞增殖的影响;通过检测细胞碱性磷酸酶活性的变化观察NTs对hDPSCs分化的影响。结果:与对照组相比,25ng/mL NGF和25ng/mL BDNF可显着促进牙髓干细胞的增殖（P<0.05）,但对细胞的分化无明显作用;同时,100ng/mL NGF和100ng/mL BDNF,对细胞的增殖无明显促进作用（P>0.05）,但可显着提高细胞碱性磷酸酶活性（P<0.05）。NT-3和NT-4/5刺激牙髓干细胞增殖活性与对照组相比无统计学意义（P>0.05）,但25ng/mL NT-3和25ng/mL NT-4/5可提高细胞碱性磷酸酶活性（P<0.05）。实验结果提示不同种类、不同浓度的NTs对细胞的作用不同。一定浓度的NGF和BDNF可对牙髓干细胞发挥明显的促增殖效应,一定浓度的NTs能显着提高牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性,提示NTs能促进牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化。
汪银雄[6]（2009）在《用牙髓干细胞构建牙齿样结构的实验研究》文中研究指明牙髓干细胞是牙齿组织工程中重要的种子细胞,自2000年发现以来已经取得了许多突破性的认识和发现,但在牙髓干细胞的进一步研究和实际应用中,还有许多问题有待认识和解决,例如今后怎样用它与其它一种或多种细胞构建复杂牙齿结构的问题,怎样在体外培养中提供合适的微环境来诱导牙髓干细胞向特定方向分化的问题,尤其是向成牙方向分化的问题。本研究首次尝试将人牙髓干细胞与异种牙胚上皮细胞构建异种嵌合体牙齿结构、检测异种牙胚细胞条件培养基对其有何诱导作用以及将牙髓干细胞与牙周膜干细胞进行复合来尝试构建工程化牙根样结构,以期为牙髓干细胞的进一步研究和应用奠定实验基础,为牙髓干细胞在今后牙齿组织工程的合理使用提供一些有益的提示和参考,并探索出用牙齿来源干细胞进行牙齿再生的一些新途径和新方法。所取得的主要结果如下:一、用牙髓干细胞制备异种嵌合体牙齿用酶消化法培养了牙髓干细胞,结果显示所培养的牙髓干细胞形态典型,表达间充质干细胞标志物STRO-1、CD106、CD29,有克隆形成能力,经诱导后有成骨和成脂肪细胞能力,表明我们培养的细胞是来源于间充质的干细胞。另外分离获得猪第三磨牙牙胚并培养牙胚细胞,用差速消化法纯化获得牙胚上皮细胞,免疫细胞化学鉴定显示其对CK14、AMBN阳性表达,而对Vimentin阴性表达。然后将人牙髓干细胞和猪的牙胚上皮细胞以不同方式复合植入到裸鼠皮下,6周后取材。结果发现大部分移植物没有形成任何有序的结构形态,但有一部分移植物中形成了含有类似牙本质、牙髓和牙釉质的牙齿样结构的组织,但是形成这种结构的概率较低。免疫组化结果证明我们形成的釉质样结构来源于猪牙胚上皮,而牙本质样结构源于人的牙髓干细胞。本部分结果表明人的牙髓干细胞和猪的牙源性上皮细胞在体内,可以模拟类似牙胚发育时期的上皮-间充质相互作用方式,相互诱导,并有可能成功形成异种嵌合体结构。因而我们推断可见只要进一步优化条件,用人的牙齿间充质干细胞与异种的牙源性上皮细胞进行异种嵌合在牙齿再生中是有一定可行性的,并将可能成为解决牙釉质再生的一条新途径。二、猪牙胚条件培养基诱导人牙髓干细胞牙向分化的实验研究以前的实验已经证实人牙胚条件培养基可以为人牙髓干细胞提供成牙微环境,诱导牙髓干细胞向成牙方向分化。但由于实际中应用人牙胚条件培养基并不可行,所以本实验中我们验证了用异种牙胚条件培养基来诱导人牙髓干细胞可行性。我们培养发育期猪的第三磨牙牙胚,并收集获得牙胚条件培养基,同时培养人的牙胚并获得人牙胚条件培养基。将猪和人的牙胚条件培养基分别诱导人的牙髓干细胞,并从体内、体外比较了猪牙胚条件培养基和人牙胚条件培养基对人牙髓干细胞的诱导作用。结果表明:人牙髓干细胞经过一定时间的猪牙胚条件培养基诱导后,能在细胞形态上和细胞周期上发生改变,能具有更高的克隆形成能力和多向分化能力,能维持更好的干细胞特性,具有更强的增殖能力,表达更高水平的碱性磷酸酶,免疫组化和RT-PCR提示诱导后的牙髓干细胞能在蛋白水平和基因水平表达出一些牙向分化的标志,如DSP、DSPP、DMP1、BSP、OCN、OPN等。此外,经猪牙胚条件培养基诱导过的人牙髓干细胞植入裸鼠体内能获得形状更为规则的牙本质-牙髓复合体样结构,而且形成这种规则结构的概率从20%提高到超过70%。这些结果与人牙胚条件培养基诱导的牙髓干细胞表现类似,但常规培养的人牙髓干细胞没有表现出特别变化。所得结果说明猪牙胚条件培养基拥有与人牙胚条件培养基一样的能力,诱导人牙髓干细胞向成牙方向分化。这提示我们异种牙胚条件培养基有可能作为一种牙齿再生的有用工具,我们在今后的牙组织工程领域,应用异种的牙胚条件培养基将有助于构建理想的工程化牙齿。三、用人牙髓干细胞和牙周膜干细胞尝试构建工程化牙根的实验研究牙髓干细胞和牙周膜干细胞是牙齿再生领域最有潜力的两个成体干细胞,那把这两种干细胞一起复合,能否在体内获得牙根样结构呢?本实验进行了这方面的初步尝试。我们体外培养了人牙周膜干细胞并对其性质进行了鉴定,结果显示牙周膜干细胞对Vimentin染色阳性,CK阴性,显示其为间充质来源, STRO-1呈阳性染色,说明培养的牙周膜干细胞具有间充质来源干细胞的表型特点。成脂、成骨诱导实验验证了牙周膜干细胞的多向分化能力与可塑性。本研究中将人的牙髓干细胞进行标记后,再与牙周膜干细胞以不同的方式复合并植入裸鼠体内,希望获得有一定结构的工程化牙根。结果显示:以牙根状CBB为支架的复合物取材后肉眼观呈外形良好的小牙根状,HE染色表明所有移植物中都有矿化发生,且能在一部分移植物中发现有典型Sharpey纤维样结构。在以CBB颗粒为支架的移植物中,肉眼观是形成了扁平状的结构,HE染色结果显示也能也有矿化现象发生,但矿化基质较牙根状CBB为支架的标本少。而单纯细胞团移植物除小部分出现了一定的矿化现象,大部分不能产生任何的有形结构。在三个实验组中都没有发现有典型牙髓牙本质复合体样结构形成。本实验结果提示我们:在构建组织工程化牙根中,支架材料最好是有预成形状的,以引导相关干细胞沿着支架生长并形成大体结构良好的牙齿样组织;另外多种细胞构建一定结构时,不同的种子细胞最好是分别复合到支架上,而不应该简单混合到一起;细胞团移植不适合于用多种细胞复合构建有良好大体观的牙齿样结构。
刘振山,耿传营,刘玉凤[7]（2008）在《牙髓干细胞的研究与进展》文中研究指明综合分析牙髓干细胞的研究现状及发展方向,以期更好地分离鉴定牙髓干细胞,提高牙髓干细胞的体外增殖活性。通过对入选文献进行分析整理,将牙髓干细胞从干细胞理论、牙髓干细胞概念、牙髓干细胞生物学特性及牙髓干细胞培养4方面进行分析。虽然目前对牙髓干细胞的生物学特性、培养方法及应用前景已有一定了解,但牙髓干细胞的体外培养扩增、鉴定和分子机制等问题尚未完全清楚,这对牙髓干细胞的应用起到决定性作用。牙髓组织取材容易,利用牙髓干细胞研究牙齿器官发育、牙髓损伤修复的分子机制,以期最终能寻找更好地解决牙髓组织损伤修复的治疗方法。
张文萍,陈瑞扬[8]（2008）在《牙髓钙化形成的原因探讨》文中研究表明目的:探讨牙髓钙化形成的过程和原因。方法:显微镜下观察正常牙齿、牙髓炎患牙和外伤牙牙髓组织的牙髓钙化形成情况,推测牙髓钙化形成的机制。结果:30例正常牙齿牙髓未见有牙髓钙化发生,也未见异常组织学变化。25例牙髓炎患牙牙髓组织中8例（32%）有髓石形成。牙髓组织有典型炎症细胞浸润区域,有些部位形成化脓灶,化脓区周边为牙髓充血区。在炎症区和充血区之间有髓石形成。25例牙髓炎中有2例出现髓腔内钙化,11例根管内牙髓充血明显,发现3例（12%）根髓弥散性钙化。20例外伤牙牙髓组织中,髓腔和根管内牙髓均充血,未见髓石形成,有3例（15%）根管内牙髓出现弥散性钙化。结论:牙髓钙化的形成与牙髓感染、炎症刺激和血管充血密切相关。髓石形成与牙髓感染或牙髓炎有密切关系。根管弥散性钙化与牙外伤或牙髓充血有密切关系。牙髓钙化可能是一种主动性修复过程,而非被动的牙髓组织变性。冠髓髓石和根髓弥散性钙化的性质可能不同,两者的形成机制可能不一致。
陆玲[9]（2008）在《脉冲Nd：YAG激光用于牙齿活髓切断术的实验和临床研究》文中进行了进一步梳理保存牙髓活力是临床上治疗牙体、牙髓病的基本原则,活髓切断术正是基于这种要求下,由Witzel在1872年首创的一种保存活髓的方法,它是指对不具备盖髓条件的未感染或感染轻微、能部分恢复健康的牙髓,切除其有局部病变的冠髓,保存其正常根髓的方法。适应症主要包括:根尖未发育完成的年轻恒牙,无论是龋源性、外伤性或机械性露髓,只要牙髓无感染均可进行牙髓切断治疗以保存活髓,直到牙根发育完成。Cavalleri和Oguntebi [1,2]]等认为,恒切牙外伤冠折露髓后,不论其根尖是否开放或封闭,切髓术均可作为常规治疗。Hermann （1930）等在早期曾发表了活髓切断的术式,而后经过许多学者的研究,证实采用适当的术式和盖髓剂,可在牙髓断面上形成明显的新生硬组织覆盖,保存剩余牙髓处于健康状态。氢氧化钙制剂是目前最常用的盖髓剂,但它还不具备理想盖髓剂的所有性能,尚不能完全满足临床要求。脉冲Nd:YAG激光用于活髓切断是新近发展起来的一种方法。然而Nd:YAG激光用于活髓切断治疗时尚缺乏深入、系统的研究。本研究拟通过动物试验以及临床两方面的研究,探讨脉冲Nd:YAG激光用于活髓切断术的有效性和安全性,了解激光用于活髓切断术的有效方式、激光的适合剂量参数,为临床行活髓切断术提供一种新的有效方法,并为临床推广、应用提供理论和实验依据。1.动物实验1.1脉冲Nd:YAG激光照射犬牙活髓切断面后对牙髓组织的影响:健康本地杂种犬3只,按3 d、7 d、30 d 3个观察期随机分为3组,在麻醉下行活髓切断术,3种参数的激光照射牙髓断面,并在3 d、7 d、30 d ,3个时间段将犬处死,立刻取下所有的实验牙,置入固定液中。牙髓组织病理学检查,实验牙置入10%福尔马林液中固定后,进行复合酸脱钙处理、石蜡包埋、切片、HE染色。病理组织学检查显示,在激光功率为1 W的条件下,牙髓组织的反应与对照组无明显差别;在激光功率为2 W的条件下,牙髓组织的反应明显优于其他组;在激光功率为3 W的条件下,牙髓组织出现成牙本质细胞空泡变性,有的地方出现牙髓坏死,牙髓反应以3 d观察期最明显。1.2脉冲Nd:YAG激光照射切髓断面后牙髓碱性磷酸酶的活性的变化:健康本地杂种犬3只,按3 d、7d、21d ,3个观察期随机分为3组,在麻醉下行活髓切断术,40 Hz 2 W 50 mJ左右的激光剂量照射牙髓断面,并在3 d、7 d、21 d,3个时间段将犬处死,立刻取下所有的实验牙,在丙酮中固定1 d,再置入复合酸中脱钙,冰冻切片后,进行钙-钴法染色以显示牙髓细胞中碱性磷酸酶活性,根据米德伶图象分析系统测定切片的灰度值,进行统计学分析。结果显示:牙髓碱性磷酸酶的活性随观察期的不同而相差显着（P<0.01）。通过实验,可初步确定40 Hz 2 W 50 mJ左右的激光剂量,5s的照射时间,即约10 J的累积能量照射切髓断面,可促进牙髓组织的愈合,对活髓切断术可有一定的辅助疗效。相同的能量密度时,激光照射时间越长对牙髓的损伤越大,随着激光照射能量的升高,牙髓组织的反应加重。2.临床实验2.1脉冲Nd:YAG激光活髓切断术安全性的体内实验研究—脉冲Nd:YAG激光活髓切断术所用剂量对人牙髓的影响,选择因正畸需要拔除的牙,经患者同意后,分成两个实验组:对照组和激光照射组,行活髓切断术,激光组以40 Hz 2 W 50 mJ的能量照射,时间为5s,按3 d、15 d、30 d ,3个时间段拔牙,置入固定液中。牙髓组织病理学检查:实验牙置入10%福尔马林液中固定后,进行复合酸脱钙处理、石蜡包埋、切片、HE染色。病理组织学检查显示,激光照射组在各时间段牙髓组织的反应均优于对照组,牙髓反应以3 d观察期最明显。2.2脉冲Nd:YAG激光活髓切断术治疗早期乳磨牙牙髓炎的临床研究:选择临床就诊3 6岁患儿的第一乳磨牙和第二乳磨牙早期牙髓炎167例,分成两个实验组:对照组和激光照射组,行活髓切断术,激光组以40 Hz 2 W 50 mJ的能量照射,时间为5s,观察期分别为半个月、一个月、三个月、半年。结果:适当的照射剂量可对活髓切断起到有益的辅助治疗作用。3.结论应用脉冲Nd:YA G激光40 Hz 2 W 50 mJ的能量照射切髓断面,不会对牙髓组织产生明显损害,能有效的起到止血、杀菌的作用,可在某种程度上增强牙髓组织的反应活性,促进牙髓细胞碱性磷酸酶的合成,促进牙本质桥的形成。因此,激光用于活髓切断术是一种较有发展前途的方法。
熊奎州[10]（2008）在《猪骨髓基质细胞的分离培养及向软骨细胞分化的研究》文中研究表明骨髓基质干细胞（Bone marrow stromal cells,BMSCs）是一类具有多向分化潜能的组织干细胞,在体内外适当的诱导环境下可以分化成为骨、软骨、脂肪、肌肉、神经、肌腱及韧带等多种细胞和组织。该细胞来源充足,取材方便,增殖能力强,可以在体外大规模扩增而不丢失多向分化潜能,并且异体移植免疫排斥反应小。目前,已成为应用较广泛的重要种子细胞之一。为了获得充足的骨髓基质干细胞来源,我们建立了猪骨髓基质干细胞的分离方法,通过体外培养和生物学鉴定,证实其为骨髓基质干细胞,并具有成骨分化性能。通过体外转导pEGFP-C1-TGF-β1入骨髓基质干细胞,在条件培养基作用下诱导其向软骨细胞分化。以期为骨组织工程和软骨损伤修复的研究提供新的策略,获得了以下结果:1.无菌采取猪股骨头,采用骨钳钳破骨髓腔,收集骨髓液于无菌离心管,沉淀制成悬液接种于培养皿,于37℃、5 % CO2条件下培养。培养的细胞为单层贴壁生长,呈成纤维样形态。CD44因子免疫组化鉴定为阳性;条件培养基诱导成骨分化,ALP染色阳性,并有矿化结节生成;结合细胞形态学观察,结果表明,分离培养的细胞为骨髓基质干细胞。开始时大多为细长梭形,增殖速度快,细胞传代周期延短,待传至第7、8代时细胞铺展得宽大而扁薄,增殖速度减慢,细胞传代周期延长,细胞内颗粒物质增多。2.从猪外周血淋巴细胞中抽提总RNA,并用TGF-β1特异性引物扩增获得TGF-β1全基因,并将TGF-β1全基因亚克隆到带有绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-C1。3.并用脂质体法转染BMSCs,通过直接荧光观察pEGFP-C1-TGF-β1融合蛋白在细胞中的分布定位,结果在转染后观察到绿色荧光,间接免疫荧光法检测TGF-β1表达均为阳性,转染后细胞失去BMSCs典型的成纤维形态,而呈现出三角、多角形态。Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示,转染TGF-β1基因后的BMSCs开始表达软骨细胞表面特异性标志物Ⅱ型胶原。综上所述,本研究在成功分离培养猪BMSCs的基础上,将TGF-β1基因转入BMSCs后,表达了软骨细胞表面标志物,说明BMSCs已向软骨细胞分化。
二、体外培养的冠髓和根髓细胞中碱性磷酸酶的活性（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、体外培养的冠髓和根髓细胞中碱性磷酸酶的活性（论文提纲范文）
（1）miR-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 人乳牙牙髓干细胞 |
| 1.2 人乳牙牙髓干细胞在神经疾病中的应用 |
| 1.3 miRNA在神经疾病发生的作用 |
| 1.4 miRNA调控神经增殖与分化 |
| 1.5 Wnt/β-catenin信号通路调控神经增殖与分化 |
| 第2章 miRNA-221 在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的表达模式及作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制 |
| 2.1.2 主要实验方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 人乳牙牙髓干细胞的形态观察及鉴定 |
| 2.2.2 人乳牙牙髓干细胞体外神经元分化体系的建立 |
| 2.2.3 miR-221 在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的表达规律 |
| 2.2.4 miR-221 促进人乳牙牙髓干细胞神经分化效率 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 miRNA-221 的靶基因确定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制 |
| 3.1.2 主要实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 生物信息学分析预测miR-221 的靶基因是CHD8 |
| 3.2.2 双荧光素酶报告基因分析验证miR-221 的靶基因是CHD8 |
| 3.2.3 miR-221 抑制人乳牙牙髓干细胞CHD8 的表达 |
| 3.2.4 CHD8 在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中表达下调 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 miRNA-221 调控人乳牙牙髓干细胞Wnt/β-catenin通路的分子机制 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制 |
| 4.1.2 主要实验方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中Wnt/β-catenin通路特征蛋白表达上调 |
| 4.2.2 miR-221 通过抑制CHD8 激活人乳牙牙髓干细胞的Wnt/β-catenin通路 |
| 4.2.3 miR-221 通过激活Wnt/β-catenin通路提高人乳牙牙髓干细胞神经分化效率 |
| 4.3 讨论 |
| 第5章 miRNA-221 通过抑制CHD8 激活Wnt/β-catenin通路促进人乳牙牙髓干细胞神经分化 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制 |
| 5.1.2 主要实验方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 miR-221 通过抑制CHD8 促进人乳牙牙髓干细胞增殖 |
| 5.2.2 miR-221 通过CHD8 促进人乳牙牙髓干细胞周期由G0/G1向S期转变 |
| 5.2.3 miR-221 通过抑制CHD8 抑制人乳牙牙髓干细胞凋亡 |
| 5.2.4 miR-221 通过抑制CHD8 促进人乳牙牙髓干细胞神经分化效率 |
| 5.2.5 CHD8 通过Wnt/β-catenin通路调控人乳牙牙髓干细胞神经分化 |
| 5.3 讨论 |
| 第6章 讨论和结论 |
| 6.1 讨论 |
| 6.2 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 |
| 综述 人乳牙牙髓干细胞的研究进展及其调控机制 |
| 参考文献 |
（2）P物质对体外培养人牙髓细胞生物学特性的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 牙髓组织中 P 物质的研究现状 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）17β-雌二醇对体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 雌激素类物质对细胞生物学特性影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）rhBMP-2和Delta-1对人牙髓干细胞分化影响的实验研究（论文提纲范文）
| 英文缩写一览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 rhBMP-2和Delta-1对人牙髓干细胞分化影响的实验研究 |
| 前言 |
| 第一部分 人牙髓干细胞的分离、培养及鉴定 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 小结 |
| 第二部分 rhBMP-2和Delta-1对人牙髓干细胞分化的影响 |
| 实验一 rhBMP-2对人牙髓干细胞分化的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 实验二 rhBMP-2与Delta-1联合应用对人牙髓干细胞分化的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 照片 |
| 参考文献 |
| 文献综述 骨形成蛋白生物学特性及其在口腔医学领域的研究进展 |
| 参考文献 |
| 研究生期间发表的主要论文 |
（5）神经营养素在人牙髓干细胞的表达及对细胞增殖分化的影响（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 正文 |
| 实验一 人牙髓干细胞的分离、培养及鉴定 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 NTs在人牙髓干细胞中的表达 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 NTs对人牙髓干细胞增殖和分化的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
| 临床病例报告 |
（6）用牙髓干细胞构建牙齿样结构的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 用牙髓干细胞构建异种嵌合体牙齿的实验研究 |
| 实验一 人牙髓干细胞的培养和鉴定 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 用人牙髓干细胞构建异种嵌合体牙齿 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 猪牙胚细胞条件培养基诱导人牙髓干细胞牙向分化的实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 人牙髓干细胞和牙周膜干细胞尝试构建工程化牙根的实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 个人简历和成果 |
| 致谢 |
| 临床病例展示 |
（8）牙髓钙化形成的原因探讨（论文提纲范文）
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
（9）脉冲Nd：YAG激光用于牙齿活髓切断术的实验和临床研究（论文提纲范文）
| 英文缩写及中英文对照 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 脉冲Nd:YAG 激光用于牙齿活髓切断术的实验和临床研究 |
| 前言 |
| 第一部分 动物实验 |
| 实验一 脉冲Nd:YAG 激光照射犬牙活髓切断面后对牙髓组织的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 实验二 脉冲Nd:YAG 激光照射切髓断面后对牙髓碱性磷酸酶活性的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 临床研究 |
| 实验一 脉冲Nd:YAG 激光活髓切断术安全性的体内实验研究—脉冲Nd:YAG激光活髓切断术所用剂量对人牙髓的影响 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 实验二 Nd:YAG 激光活髓切断术治疗乳磨牙牙髓炎的临床研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 照片 |
| 参考文献 |
| 文献综述 活髓切断术的研究现状 |
| 参考文献 |
| 研究生期间发表文章一览表 |
（10）猪骨髓基质细胞的分离培养及向软骨细胞分化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 骨髓基质细胞分离培养及诱导分化研究进展 |
| 1.1 骨髓基质细胞的分离培养 |
| 1.1.1 骨髓基质细胞概述 |
| 1.1.2 骨髓基质干细胞分离及鉴定 |
| 1.2 骨髓基质细胞的诱导分化 |
| 1.2.1 细胞因子的作用 |
| 1.2.2 化学物质的作用 |
| 1.2.3 BMSCs 向神经细胞诱导分化 |
| 1.2.4 BMSCs 向心肌细胞诱导分化 |
| 1.2.5 BMSCs 向成软骨细胞诱导分化 |
| 1.2.6 BMSCs 向成肌细胞、脂肪细胞、血管内皮细胞的诱导分化 |
| 1.3 骨髓基质细胞的应用进展 |
| 1.3.1 骨髓基质干细胞在骨组织工程学中的应用 |
| 1.3.2 MSCs 应用于肌肉、肌腱再生 |
| 1.3.3 MSC 应用于造血系统 |
| 1.3.4 MSC 应用于神经系统 |
| 试验研究 |
| 第二章 猪BMSCS 的分离培养及生物学特性研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 |
| 2.1.4 细胞培养用试剂 |
| 2.2 方法与步骤 |
| 2.2.1 猪BMSCs 分离及原代培养 |
| 2.2.2 猪BMSCs 传代培养 |
| 2.2.3 猪BMSCs 生长曲线、分裂指数曲线和贴壁率的测定 |
| 2.2.4 猪BMSCs 向成骨细胞诱导 |
| 2.2.5 碱性磷酸酶（ALP）染色 |
| 2.2.6 细胞免疫化学法鉴定BMSCs |
| 2.2.7 衰老细胞染色 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 细胞形态及生长特征 |
| 2.3.2 猪BMSCs 成活率检测 |
| 2.3.3 猪BMSCs 传代培养 |
| 2.3.4 猪BMSCs 生长曲线、分裂指数曲线及贴壁率 |
| 2.3.5 猪BMSCs 碱性磷酸酶（ALP）染色 |
| 2.3.6 猪BMSCs 的免疫化学鉴定 |
| 2.3.7 猪BMSCs 的衰老细胞染色结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 PEGFP-C1-TGF-Β1 真核表达质粒的构建与鉴定 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 质粒、细胞及主要试剂 |
| 3.1.2 主要试剂配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 猪TGFβ1 全基因的扩增、克隆及序列测定 |
| 3.2.2 重组真核表达质粒pEGFP-C1-TGF-β1 的构建 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 TGF-β1 基因RT-PCR 鉴定 |
| 3.3.2 重组质粒pMD18-T -TGF-β1 的酶切、PCR 及序列测定 |
| 3.3.3 重组真核表达质粒pEGFP-C1-TGF-β1 的鉴定 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 猪骨髓基质细胞向软骨细胞分化的研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 软骨细胞诱导分化液 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 pEGFP-C1-TGF-β1 质粒纯度和浓度的检测 |
| 4.2.2 pEGFP-C1-TGF-β1 质粒转染猪骨髓基质细胞 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 pCI-neo-hTERT 质粒纯度和浓度的检测 |
| 4.3.2 新霉素（G418）对猪骨髓基质细胞最佳维持浓度的确定 |
| 4.3.3 转染细胞形态和特征 |
| 4.3.4 分组诱导分化结果 |
| 4.3.5 Ⅱ型胶原免疫组化染色 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、体外培养的冠髓和根髓细胞中碱性磷酸酶的活性（论文参考文献）
- [1]miR-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及机制研究[D]. 文冰. 南昌大学, 2020
- [2]P物质对体外培养人牙髓细胞生物学特性的影响[D]. 田丽华. 河北医科大学, 2014(09)
- [3]17β-雌二醇对体外培养人牙髓细胞的生物学特性影响的实验研究[D]. 程东梅. 河北医科大学, 2013(12)
- [4]rhBMP-2和Delta-1对人牙髓干细胞分化影响的实验研究[D]. 于娜. 第三军医大学, 2009(07)
- [5]神经营养素在人牙髓干细胞的表达及对细胞增殖分化的影响[D]. 王晓东. 第四军医大学, 2009(12)
- [6]用牙髓干细胞构建牙齿样结构的实验研究[D]. 汪银雄. 第四军医大学, 2009(12)
- [7]牙髓干细胞的研究与进展[J]. 刘振山,耿传营,刘玉凤. 中国组织工程研究与临床康复, 2008(34)
- [8]牙髓钙化形成的原因探讨[J]. 张文萍,陈瑞扬. 临床口腔医学杂志, 2008(05)
- [9]脉冲Nd：YAG激光用于牙齿活髓切断术的实验和临床研究[D]. 陆玲. 第三军医大学, 2008(03)
- [10]猪骨髓基质细胞的分离培养及向软骨细胞分化的研究[D]. 熊奎州. 西北农林科技大学, 2008(01)